目的 探討藍光光照強度、時間與大鼠視網膜色素上皮（RPE）細胞復制衰老的關系。方法 將36只鼠齡12~14周的Wistar大鼠置于懸有波長為（450plusmn;10） nm的醫用藍光燈管的自制光照架中。隨機分為4組，每組9只大鼠，1組：無光照對照組；2組：自然光照組；3組：500 lx光照組；4組：1000 lx光照組。每組按照照射時間再分為1、2、3個月組3個亞組，分別在1、2、3個月時行10％水合氯醛腹腔注射麻醉后取出眼球，將右眼球行石蠟切片，蘇木精伊紅（HE）染色；左眼球行冰凍切片，采用衰老相關beta;半乳糖苷酶（SA-beta;-Gal）染色方法觀察RPE細胞染色陽性情況。采用SPSS 11.5統計軟件對結果數據進行統計學分析。結果 不同光照強度組、不同光照時間組大鼠RPE 細胞SA-beta;-Gal染色陽性細胞個數差異有統計學意義（F＝510.309，55.016；P＝0.000）；組間兩兩比較，除1組與2組之間差異無統計學意義外（P＝0.154），其它各組之間差異均有統計學意義（P＝0.000）。在單一光照強度條件下，除1組大鼠RPE細胞SA-beta;-Gal染色陽性細胞個數差異無統計學意義外（P=0.897）,其余各組差異均有統計學意義（P＜0.01）；在單一時間條件下，各組差異均有統計學意義（P＝0.000）。結論 同一藍光光照強度下，隨著時間的增加大鼠視網膜RPE細胞逐漸出現復制衰老改變;同一時間條件下，隨光照強度增加大鼠視網膜RPE細胞也逐漸出現復制衰老改變。
神經干細胞（NSC）是一類能向神經細胞和膠質細胞分化的特殊干細胞。Müller細胞作為視網膜主要內源性NSC，具有在視網膜損傷后進入細胞周期增生并分化為神經細胞的能力。在脊椎動物中，視網膜Müller細胞的內源性NSC自發再生有著很高的效率，而哺乳動物這一能力幾乎完全消失。深入研究發現，Ascl1、Sox2、Lin28、Atoh7等部分轉錄因子具有促進Müller細胞增生并分化為神經細胞的功能。而Ascl1聯合組蛋白脫乙酰酶抑制劑更能使小鼠Müller細胞分化的神經細胞整合進入已有的視網膜并能對光做出反應，從而可能挽救視力。但與斑馬魚相比，哺乳動物Müller細胞增生再生能力依然十分有限。尋找更多能增強Müller細胞分化能力的新因子將成為亟待解決的重要問題。
目的分析增生型糖尿病視網膜病變（PDR）25G玻璃體切割手術（PPV）后發生新生血管性青光眼（NVG）的危險因素。方法回顧性病例研究。2017年1月至2018年12月在天津醫科大學眼科醫院首次行PPV治療的PDR合并玻璃體積血（VH）患者340例340只眼納入研究。其中，男性185例，女性155例；平均年齡（55.79±10.82）歲。患者平均糖尿病病程（13.01±7.70）年；平均空腹血糖（7.55±2.15）mmol/L。合并冠心病19例，合并腦梗死20例。所有患眼均行最佳矯正視力（BCVA）、眼壓、間接檢眼鏡、彩色眼底照相等檢查。BCVA檢查采用國際標準Snellen視力表進行，并將結果換算為最小分辨角對數（logMAR）視力記錄。患眼平均logMAR BCVA 2.04±0.73，平均眼壓（15.45±2.93）mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）。VH持續時間3周～6個月，平均時間（2.98±1.46）個月。340只眼中，Ⅳ期93只眼（27.35%），Ⅴ期107只眼（31.47%），Ⅵ期116只眼（34.12%）；伴牽引性視網膜脫離（TRD）83只眼。所有患眼均行25G標準經睫狀體平坦部三通道PPV。57只眼手術前3 d行玻璃體腔注射抗血管內皮生長因子（VEGF）藥物治療，234只眼手術中剝除內界膜，262只眼同時行白內障超聲乳化手術，141只眼手術完畢時行玻璃體腔注射抗VEGF藥物治療。手術后隨訪至少12個月，平均隨訪時間（10.80±5.79）個月。以裂隙燈顯微鏡或房角鏡檢查發現虹膜和（或）房角存在新生血管且眼壓＞21 mmHg者診斷為NVG。采用Kaplan-Meier法和Cox單因素、多因素回歸分析手術前基線因素、眼部因素、手術因素與手術后NVG發生的關系。結果340只眼中，PPV后發生NVG者66只眼（19.41%）；發生NVG的時間為手術后6～335 d，平均時間為（98.00±5.79）d。PPV后第3、6、12個月，NVG發生風險比分別為11.50%、15.29%、20.75%。單因素Cox分析結果表明，年齡、合并冠心病或腦梗死疾病等手術前基線因素對手術后發生NVG有影響（P＜0.05）；PDR分期、合并TRD、手術前logMAR BCVA、手術前眼壓等眼部因素對手術后發生NVG無影響（P＞0.05）；聯合白內障超聲乳化手術、手術中剝除內界膜、手術前3 d玻璃體腔注射抗VEGF藥物等手術因素對手術后發生NVG有影響（P＜0.05）。將Cox單因素分析有意義的變量納入多因素Cox比例風險模型進行分析，逐步回歸探索手術后NVG的影響因素。結果顯示，年齡、合并冠心病或腦梗死、聯合白內障超聲乳化和手術中內界膜剝除是手術后發生NVG的獨立風險預測因素（P＜0.05）。結論低齡、合并冠心病或腦梗死、聯合白內障超聲乳化手術是PDR患者PPV后發生NVG的危險因素，手術中剝除內界膜可減少NVG的發生。
目的觀察27G玻璃體切割手術（PPV）聯合Healaflow覆蓋封閉視網膜裂孔和空氣填充治療原發性孔源性視網膜脫離（RRD）的安全性和有效性。方法以臨床為基礎的前瞻性連續研究。2017年3月至2018年5月于天津醫科大學眼科醫院檢查確診并行PPV治療的原發性RRD患者50例51只眼納入研究。患眼均行27G PPV，視網膜完全復位后，視網膜裂孔周圍及變性區行激光光凝；使用27G鈍性針頭將Healaflow完全覆蓋于視網膜裂孔表面，注射量根據視網膜裂孔大小確定，以裂孔完全被包含為標準。手術后無體位限制。手術后平均隨訪時間（15.8±6.3）個月。觀察首次和最終視網膜復位率、BCVA、視網膜脫離復發情況；手術中、手術后并發癥等。結果50例51只眼納入研究。其中，男性29例（58.0%），女性21例（42.0%）。平均年齡（58.5±11.2）歲。單一裂孔28只眼（54.9%）；2～5個裂孔23只眼（45.1%）。是否累及黃斑區分別為32（62.7%），19（37.3%）只眼。首次視網膜復位50只眼（98.0%），最終所有患眼均復位（100.0%）。手術前、手術后3個月logMAR BCVA分別為0.95±0.80、0.22±0.17；手術前后logMAR BCVA比較，差異有統計學意義（t=7.336，P＜0.001）。手術后一過性眼壓升高31只眼（60.8%）。隨訪期間無其他并發癥發生。結論27G PPV聯合Healaflow覆蓋視網膜裂孔和空氣填充治療原發性RRD，成功率高，視功能恢復快；安全、有效。
目的觀察病理性近視（PM）患者房水標本中蛋白質表達譜的變化。方法橫斷面研究。2019年1～8月在天津醫科大學眼科醫院收集32例老年性白內障患者的房水樣本進行質譜檢測。其中，男性11例，女性21例；年齡58～76歲，平均年齡（68.41±6.09）歲。將合并PM的16例作為PM組，不合并近視的16例作為對照組。所有患者在白內障手術操作之前從手術眼收集100～150 μl前房水。采用蛋白定量和非標記液相色譜串聯質譜分析，得到差異表達蛋白。隨機選取5個差異蛋白進行ELISA驗證。然后用基因注釋功能富集、京都基因和基因組百科全書通路富集等生物信息學分析方法分析差異表達蛋白的功能。結果兩組房水標本中共鑒定出583個可定量蛋白質，其中101個蛋白存在差異表達，包括63個上調蛋白和38個下調蛋白。ELISA驗證結果顯示，5個差異表達蛋白在PM組和對照組之間的表達變化趨勢均與非標記定量蛋白質組學分析結果相一致。這些差異表達蛋白的分類主要包括蛋白結合活性調節因子、防御/免疫蛋白、蛋白質修飾酶、代謝物間轉換酶、細胞外基質蛋白等。生物信息學分析表明，PM與炎癥和免疫相互作用以及細胞外基質的重塑密切相關。結論PM患者房水標本中蛋白質表達譜較對照組有明顯變化，這些差異變化提示PM與炎癥和免疫相互作用以及細胞外基質的重塑密切相關。
目的對比分析一站式玻璃體腔注射抗血管內皮生長因子（VEGF）藥物（以下簡稱為玻璃體腔注藥）中心成立前后真實世界中玻璃體腔注藥的應用情況和不同管理模式下的成效。方法回顧性臨床研究。2018年7月至2022年6月于天津醫科大學眼科醫院接受抗VEGF藥物治療的眼底疾病患者4 015例4 659只眼納入研究。其中，男性2 146例，女性1 869例。滲出型老年性黃斑變性（wAMD）968例1 090只眼；糖尿病黃斑水腫（DME） 654例855只眼；糖尿病視網膜病變（DR）980例1 158只眼；視網膜靜脈阻塞繼發黃斑水腫（RVO-ME）916例930只眼；病理性近視繼發脈絡膜新生血管（PM-CNV）275例294只眼；其他眼底疾病222例332只眼。共計注射13 796針抗VEGF藥物。將2018年7月至2020年6月于玻璃體腔注藥中心成立前接受抗VEGF藥物治療的1 252例1 403只眼作為對照組；2020年7月至2022年6月于玻璃體腔注藥中心接受抗VEGF藥物治療的2 763例3 256只眼作為觀察組。對比觀察對照組、觀察組玻璃體腔注藥的總體針數、按疾病分類后每種疾病接受抗VEGF藥物治療的分布狀態、選擇3+按需治療（PRN）方案的比例、不同抗VEGF藥物的臨床應用分布，同時使用問卷調查記錄患者等待時間和就醫體驗。兩組間比較，計數資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗。結果 4 659只眼13 796針抗VEGF藥物中，對照組1 403只眼4 762針，每只眼注射（3.39±3.78）針；觀察組3 256只眼9 034針，每只眼注射（2.78±2.27）針。兩組患眼平均注射針數比較，差異有統計學意義（t=6.900，P＜0.001）。對照組、觀察組患眼中，wAMD者分別注射1 728、2 705針，平均每只眼分別注射（5.14±4.56）、（3.59±2.45）針；DME者分別注射982、2 038針，平均每只眼分別注射（4.36±4.91）、（3.24±2.77）針；RVO-ME者分別注射942、2 179針，平均每只眼分別注射（3.98±3.71）、（3.14±2.15）針；PM-CNV者分別注射291、615針，平均每只眼分別注射（3.31±2.63）、（2.99±1.69）針；DR者分別注射683、1 029針，平均每只眼分別注射（1.60±1.26）、（1.41±1.05）針。對照組、觀察組患眼中接受3+PRN治療方案者，wAMD分別為223（66.4%，223/336）、431（57.2%，431/754）只眼，差異有統計學意義（χ2=8.210，P=0.004）；DME分別為75（33.3%，75/225）、236（37.5%，236/630）只眼，差異無統計學意義（χ2=1.220，P＞0.05）；RVO-ME分別為97（40.9%，97/237）、355（51.2%，355/693）只眼，差異有統計學意義（χ2=7.498，P=0.006）；PM-CNV分別為39（44.3%，39/88）、111（53.9%，111/206）只眼，差異無統計學意義（χ2=2.258，P＞0.05）。問卷調查結果顯示，對照組、觀察組患者間預約等待手術時間（t=1.340）、注藥當天入院至進入手術室時間（t=2.780）、手術前完成治療準備至等待進入手術室時間（t=8.390）、入院至離院時間比較（t=6.060），差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論一站式玻璃體腔注藥模式可顯著提升工作效率，大幅增加注藥數量；極大縮短患者等待時間，患者整體就醫體驗改善明顯。
目的觀察聚嘧啶束結合蛋白相關剪接因子（PSF）高表達對糖基化終末產物（AGEs）誘導下RPE細胞損傷的保護作用。方法將體外培養的人RPE細胞分為正常對照組（N組）、空白對照組（N+AGAGEs組）、空載體對照組（Vec+AGEs組）、PSF高表達組（PSF+AGEs組）。N組RPE細胞常規培養；N+AGEs組只做轉染處理但不導入任何外源性基因的RPE細胞聯合AGEs誘導；Vec+AGEs組、PSF+AGEs組利用轉染試劑脂質體2000將pcDNA空載體或pcDNA-PSF真核表達質粒導入RPE細胞聯合AGEs誘導。除N組以外，其余3組細胞進行相應的轉染處理，24 h后應用150 μg/ml的AGEs刺激72 h。采用HE染色和Hoechst 33258染色觀察PSF高表達對RPE細胞凋亡相關形態改變的影響；通過ROS水平檢測分析PSF高表達對AGEs誘導的RPE細胞ROS表達的影響；采用MTT比色法檢測PSF高表達對RPE細胞生存力的影響；采用Western blot檢測PSF不同作用時間及不同劑量對血紅素氧合酶1（HO-1）表達的影響。結果HE染色和Hoechst 33258染色觀察發現，N組細胞形態飽滿，細胞核呈圓形，細胞質豐富，染色均一；N+AGEs組、Vec+AGEs組細胞體積縮小，嗜酸性染色增強，細胞核致密濃染、固縮甚至碎裂；PSF+AGEs組細胞形態尚飽滿，細胞漿染色較均勻，細胞核染色均一。MTT比色法檢測結果顯示，PSF高表達可有效提高RPE細胞生存力，但該作用可被ZnPP有效拮抗，且差異有統計學意義（F=33.26，P＜0.05）。DCFH-DA法檢測結果顯示，與N+AGEs組、Vec+AGEs組比較，PSF+AGEs組細胞中ROS產量下降，差異有統計學意義（F=11.94，P＜0.05）。Western blot檢測結果顯示，PSF蛋白以時間、劑量依賴性的方式上調HO-1的表達水平。PSF蛋白作用24、48、72 h的HO-1相對表達水平較0 h明顯升高，差異有統計學意義（F=164.91，P＜0.05）。0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 μg PSF蛋白作用下的HO-1相對表達水平較0.0 μg明顯升高，差異有統計學意義（F=104.82，P＜0.05）。結論PSF可能通過上調HO-1的表達而抑制ROS產生，從而對AGEs誘導下的RPE細胞損傷發揮保護作用。
目的觀察慢病毒介導聚嘧啶束結合蛋白相關剪接因子（PSF）對氧誘導視網膜病變（OIR）小鼠視網膜新生血管的抑制作用。方法5日齡C57BL/6J小鼠112只隨機分為正常對照組、單純OIR模型組、OIR模型+慢病毒空載體處理組（以下簡稱Vec組）及OIR模型+ PSF慢病毒處理組（以下簡稱PSF組），分別為16、32、32、32只。小鼠7日齡時，正常對照組小鼠常規環境飼養；單純OIR模型組、Vec組及PSF組小鼠建立OIR模型。小鼠12日齡時，Vec組、PSF組小鼠玻璃體腔分別注射滴度為1×1011 TU/ml的空載體病毒或PSF慢病毒1 μl。正常對照組和單純OIR模型組小鼠不再做任何處理。小鼠17日齡時，采用HE染色計數突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核；作視網膜鋪片，測量各組小鼠視網膜無灌注區相對面積；采用實時定量PCR檢測各組小鼠視網膜中NF-E2相關因子2（Nrf2）和血紅素氧合酶1（HO-1）的mRNA相對表達量；采用Western blot檢測各組小鼠視網膜中Nrf2、HO-1及PSF的蛋白相對表達量。組間比較采用單因素方差分析。結果正常對照組、單純OIR模型組、Vec組、PSF組小鼠突破內界膜的血管內皮細胞核數分別為0.00、14.36±5.50、15.67±4.96、8.13±2.09個；視網膜無灌注區面積分別為0.00%、（35.71±2.81）%、（36.57±4.53）%、（15.33±4.75）%。4組間小鼠突破內界膜的血管內皮細胞核數及視網膜無灌注區面積比較，差異均有統計學意義（F=24.87、165.70，P＜0.05）。組間兩兩比較，單純OIR模型組、Vec組較正常對照組突破內界膜的血管內皮細胞核數增多，視網膜無灌注區面積增大；PSF組較單純OIR模型組、Vec組突破內界膜的血管內皮細胞核數減少，視網膜無灌注區面積減小，差異均有統計學意義（P＜0.05）。實時定量PCR及Western blot檢測結果顯示，4組間小鼠視網膜Nrf2、PSF mRNA相對表達量（F=53.66、83.54）以及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相對表達量（F=58.38、52.69、24.79）比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。組間兩兩比較，單純OIR模型組、Vec組小鼠視網膜Nrf2、PSF mRNA相對表達量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相對表達量較正常對照組明顯降低，PSF組小鼠視網膜Nrf2、PSF mRNA相對表達量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相對表達量較單純OIR模型組、Vec組明顯增加，差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論慢病毒介導的PSF可通過上調Nrf2及HO-1的表達抑制OIR小鼠視網膜新生血管形成。
目的觀察多聚嘧啶序列結合蛋白相關剪接因子（PSF）對缺氧誘導的人視網膜微血管內皮細胞（hRMECs）功能的影響。方法采用三質粒系統構建慢病毒顆粒（LV）-PSF。LV-PSF體外感染hRMECs后通過流式細胞計數法測定其感染效率。應用實時定量PCR（RT-PCR）檢測經LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA表達水平。將實驗分為體內和體外兩部分。體內實驗：7日齡健康C57B/L6小鼠20只，采用隨機數字表法分為正常組、氧誘導視網膜病變（OIR）組、OIR+LV-空載體（Vec）組和OIR+LV-PSF組，每組5只。除正常組外，其余3組構建OIR模型。OIR組除缺氧刺激外，不做其余處理。OIR+LV-Vec組和OIR+LV-PSF組小鼠分別玻璃體腔注射LV-Vec或LV-PSF。觀察LV-PSF對視網膜新生血管（RNV）形成的影響。體外實驗：將hRMECs分為正常組、缺氧組、空載組、PSF高表達組。正常組為正常體外培養的hRMECs；缺氧組為缺氧刺激3 h恢復正常培養條件24 h的hRMECs；空載組、PSF高表達組分別為用LV-Vec、LV-PSF感染48 h，再用缺氧刺激3 h恢復正常培養條件24 h的hRMECs。采用MTT比色法觀察PSF對細胞增生能力的影響。采用細胞劃痕實驗和Transwell遷移實驗觀察PSF對缺氧刺激下細胞遷移能力的影響。采用RT-PCR觀察各組細胞中HIF-1α、VEGF及PSF的mRNA表達。結果成功構建可穩定高表達PSF的LV-PSF，流式細胞儀測定其感染效率為97%，RT-PCR測得經LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA水平明顯上調。體內實驗：OIR組、OIR+LV-Vec組小鼠RNV面積較正常組明顯增加（t=18.31、43.71），OIR+LV-PSF組小鼠RNV面積較OIR組（t=11.30）、OIR+LV-Vec組（t=15.47）明顯減小，差異均有統計學意義（P＜0.05）。體外實驗：MTT比色法檢測結果顯示，缺氧組hRMECs增生能力較正常組明顯增強（t=2.57），PSF高表達組hRMECs增生能力較正常組、缺氧組、空載組明顯降低（t=5.26、5.46、3.73），差異均有統計學意義（P＜0.05）。細胞劃痕實驗結果顯示，缺氧刺激3 h恢復正常條件24 h或48 h均可刺激缺氧組與空載組細胞明顯遷移（t=8.35、13.84，P＜0.05）；而與缺氧組與空載組比較，PSF高表達組細胞遷移不明顯（t=10.99、18.27、9.75、8.93、26.94、7.01，P＜0.05）。Transwell小室實驗結果顯示，正常組和空載組微孔膜上染色的細胞數較多，而PSF高表達組微孔膜上染色的細胞數明顯減少（t=9.33、6.15，P＜0.05）。RT-PCR檢測結果顯示，與正常組比較，缺氧組、空載組hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表達明顯增加（t=15.23、21.09，P＜0.05），PSF mRNA表達無明顯變化（t=0.12、2.15， P＜0.05）；與缺氧組、空載組比較，PSF高表達組hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表達明顯下降（t=10.18、13.10，P＜0.05），PSF mRNA表達明顯增加（t=65.00、85.79，P＜0.05）。結論PSF可減少OIR模型小鼠RNV面積。PSF可能通過HIF-1α/VEGF信號通路抑制缺氧誘導的hRMECs增生和遷移。
